利来国际的小鼠纤维肉瘤细胞MCA-205培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）。
培养体系：1640培养基 + 10% FBS（胎牛血清）。
传代方法：第一次建议1:2传代，通常在2天后换液。
备注：请用无菌离心管收集培养基以进行对比实验。如果对比效果不佳，建议直接选购我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，培养至良好状态，灌满完全培养液并封闭瓶口，这是运输细胞的最佳方式。处理前请用75%酒精喷洒整个细胞瓶消毒，然后在超净工作台进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行操作。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（推荐40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片视为状态良好。注意，在将培养瓶放入培养箱时，盖子需要稍微松开。传代时，推荐一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 如果细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2的孵箱；
2. 若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：
- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞脱落情况；
- 细胞大部分脱落后，加入5ml以上的完全培养基以终止消化；
- 吹打细胞使之完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬；
- 将细胞悬液按1:2比例分装（分装至两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放回37℃、5% CO2的培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖率达到80%时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞；
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使其脱落；
3. 将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM离心5分钟；
4. 弃去上清，加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管；
5. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，后续若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（记得佩戴防护装备），迅速放入37℃水浴解冻，直至无结晶；
2. 用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
3. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000RPM离心5分钟；
4. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2的培养箱中培养；
5. 次日更换新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞可能在运输过程中因贴壁不牢而脱落，这属于正常现象。请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟后，收集上清用于过渡培养。之后，添加1-2ml胰酶，轻轻吹打，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止消化。再次离心，弃去上清，重悬并按1:2比例进行传代，补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，最终放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1. 如果细胞出现问题，可进行以下重发处理：
- 运输过程中造成的细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况，均可重发；
- 细胞污染问题需在收到产品48小时内反馈真实的实验结果，核实后重发；
- 常温发货细胞静置24小时或干冰发货细胞复苏后24小时内，若大部分细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发；
- 若细胞在复苏后24小时或常温发货后静置4小时内出现污染，亦可重发；
- 对于细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实时可重发；
- 收到细胞当天、第2、第3天请拍照，如未在3天内告知则视为合格。若4-7天内出现问题，需提供收到前3天的照片、问题出现时的照片及相关操作的详细步骤，技术人员将判定是否重发。

2. 不予重发的情况包括：
- 客户造成的细胞污染；
- 不正确的操作导致细胞状态不佳；
- 非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不良；
- 未提供培养前3天照片的细胞状态差；
- 细胞培养时经过其他处理的；
- 收到细胞2天内未告知的情况；
- 其他具体情况需再议。