荧光定量PCR技术自问世以来,已在生物医疗领域的许多方面发挥了重要作用。以下是其主要应用领域:
1. 核酸定量分析
荧光定量PCR可用于传染性疾病的定量和定性分析,特别是病原微生物或病毒含量的检测。例如,针对近期流行的甲型H1N1流感,科研人员能够有效测定病毒载量。此外,该技术还广泛应用于转基因动植物基因拷贝数的检测和RNAi基因失活率的评估。
2. 基因表达差异分析
通过比对不同处理样本中特定基因的表达差异(如药物、物理或化学处理),研究人员可以明确特定基因在不同时间节点的表达变化,从而确认cDNA芯片或差异分析的结果。
3. SNP检测
单核苷酸多态性(SNP)的检测对研究个体对疾病的易感性和对特定药物的反应具有重要意义。得益于分子信标技术的巧妙设计,已知SNP的序列信息后,采用荧光定量PCR技术进行高通量检测将十分简便且准确。
4. 甲基化检测
甲基化与多种人类疾病,尤其是癌症相关。Laird提出了一种名为Methylight的技术,通过在扩增前处理DNA,将未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶,而甲基化胞嘧啶则不受影响,结合特异性的引物与Taqman探针,可以高效区分甲基化和非甲基化的DNA。这些方法的便利性及高灵敏度使得检测更为高效。
5. 产前诊断
由于目前尚无办法治疗由于遗传性物质改变引起的遗传病,产前监测已成为减少病婴出生的重要手段。为减少X连锁遗传病的出生,通过从孕妇周边血液中分离胎儿DNA,并应用实时荧光定量PCR检测其Y染色体决定区基因,为孕妇提供了一种无创、易接受的检测方法。
6. 病原体检测
荧光定量PCR技术可有效检测淋球菌、沙眼衣原体、解尿支原体、人类乳头瘤病毒等病原体。相较于传统检测方法,该技术具有高灵敏度、少取样量和快速便携等优势,极大提升了病原体的定量测定效率。
7. 药物疗效考核
对于乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)的定量分析揭示了病毒量与某些药物疗效之间的关系。例如,当HCV高表达时,干扰素的治疗效果降低,而低滴度则增强干扰素敏感性。此外,在拉米夫定治疗过程中HBV-DNA血清水平的波动可以提示病毒的变异。
8. 肿瘤基因检测
虽然肿瘤发病机理尚未完全明确,但与癌症相关的基因突变已被广泛接受为致癌的核心因素。实时荧光定量PCR不仅能有效检测基因突变,还能准确测定癌基因的表达量。目前,该技术已应用于端粒酶hTERT基因、慢性粒细胞白血病WT1基因等多种基因的表达监测,展示了其在疾病早期发现方面的潜力。
在生物医疗领域,利来国际凭借其卓越的技术和服务,致力于推动荧光定量PCR技术的发展,助力科研及临床应用的广泛应用,提升生物医学研究的有效性和准确性。